真核细胞中前体mRNA(Pre-mRNA)的剪接是一种重要的生物过程。已有研究表明,许多剪接体基因的突变会引起人类眼疾。RP9(pre-mRNA剪接因子)的突变,易导致常染色体显性视网膜色素病变(adRP),并伴有早发和严重视力丧失。但是,RP9突变引起感光细胞退化的分子机制尚不明确。
真核细胞中前体mRNA(Pre-mRNA)的剪接是一种重要的生物过程。已有研究表明,许多剪接体基因的突变会引起人类眼疾。RP9(pre-mRNA剪接因子)的突变,易导致常染色体显性视网膜色素病变(adRP),并伴有早发和严重视力丧失。但是,RP9突变引起感光细胞退化的分子机制尚不明确。
文章通过CRISPR/Cas9系统对RP9敲除和点突变(Rp9, c.A386T, P.H129L),与报道过的色素性视网膜炎感光细胞661 W(RP9, c.A410T, P.H137L)相类似。研究结果发现,突变型细胞的增殖和侵袭能力明显下降,并结合RNA-seq数据,RP(色素性视网膜炎)相关基因Fscn2 和 Bbs2在突变型细胞中出现下调。并且,Fscn2 前体mRNA剪接受到显著影响。文章结果揭示了RP9和疾病特异性基因之间的功能性关系,提供了一种与RP9相关的色素性视网膜炎发病机制的新观点。
研究材料:
鼠源661W(锥生细胞系)–Cas9/sgRNA转染,Rp9-KI和Rp9-KO,以及对照661W
转录组测序—Illumina HiSeq 2500,3个样本:KI 、KO、对照
1. 661W视锥细胞验证—-免疫组化染色
为鉴定661W细胞是视锥细胞还是视杆细胞,进行免疫染色,结果呈现阳性,表明细胞是视锥细胞起源的。
红/绿视蛋白(A)蓝视蛋白(B)锥蛋白(C)视紫红质(D)