真核细胞中前体mRNA(Pre-mRNA）的剪接是一种重要的生物过程。已有研究表明，许多剪接体基因的突变会引起人类眼疾。RP9（pre-mRNA剪接因子）的突变，易导致常染色体显性视网膜色素病变(adRP)，并伴有早发和严重视力丧失。但是，RP9突变引起感光细胞退化的分子机制尚不明确。
基于CRISPR-Cas9对鼠感光细胞进行RP9基因敲除和突变研究RP病变分子机制
Targeted RP9 ablation and mutagenesis in mouse photoreceptor cells by CRISPR-Cas9.
- PMID：28216641
- 杂志：Scientific reports
- 影响因子：5.578
研究背景：
研究目的：
文章通过CRISPR/Cas9系统对RP9敲除和点突变(Rp9, c.A386T, P.H129L)，与报道过的色素性视网膜炎感光细胞661 W(RP9, c.A410T, P.H137L)相类似。研究结果发现，突变型细胞的增殖和侵袭能力明显下降，并结合RNA-seq数据，RP（色素性视网膜炎）相关基因Fscn2 和 Bbs2在突变型细胞中出现下调。并且，Fscn2 前体mRNA剪接受到显著影响。文章结果揭示了RP9和疾病特异性基因之间的功能性关系，提供了一种与RP9相关的色素性视网膜炎发病机制的新观点。
材料方法：
研究材料：
鼠源661W（锥生细胞系）–Cas9/sgRNA转染，Rp9-KI和Rp9-KO，以及对照661W
测序方法：
转录组测序—Illumina HiSeq 2500，3个样本：KI 、KO、对照
技术路线：
实验结果：
1. 661W视锥细胞验证—-免疫组化染色
为鉴定661W细胞是视锥细胞还是视杆细胞，进行免疫染色，结果呈现阳性，表明细胞是视锥细胞起源的。
红/绿视蛋白（A）蓝视蛋白（B）锥蛋白（C）视紫红质（D）